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多肽合成相關
蛋白表達相關
抗體制備相關
1、提供哪些多肽定制服務?
三羊開肽可提供優(yōu)質(zhì)的多肽合成、快速多肽合成、多肽文庫構建和大規(guī)模多肽合成服務。
2、多肽合成使用的是什么辦法?
三羊開肽引進的是國外先進的固相合成技術,可以根據(jù)客戶需求進行個性化的多肽定制。
3、最長可以合成多少長度的多肽?
三羊開肽可以合成長達189個氨基酸序列的多肽,可提供毫克級到千克級,純度可達99%。
4、合成一條多肽,常規(guī)需要多久時間?
根據(jù)多肽序列長度和難易程度的不同,合成時間有所不同。常規(guī)多肽合成時間大約為2周。三羊開肽還可以提供快速多肽合成服務,最快可3天交付。
5、多肽采用何種形式發(fā)貨?
三羊開肽的多肽以凍干粉形式發(fā)貨,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異,儲存在2ml離心管內(nèi),同時可按客戶需求進行分裝。
6、產(chǎn)品交付時提供哪些數(shù)據(jù)報告?
每條多肽均提供MS和HPLC報告。同時,我們還可以根據(jù)客戶需求提供溶解度報告及內(nèi)毒素測試報告。
7、多肽如何儲存?
多肽想長期保存得話需要避光,并應保存在-20度環(huán)境內(nèi),盡可能地保持多肽穩(wěn)定性;短期保存可以保存在4度環(huán)境內(nèi)。短期運輸中外界溫度對多肽的有效期和質(zhì)量不會有影響。
8、多肽合成中如果遇到問題該如何處理?
每條多肽都具有特殊的性質(zhì),在合成過程中有時不能達到預期的結果。如果由于一些特殊原因,三羊開肽不能成功交付多肽樣品,技術人員將會及時與您溝通聯(lián)系。
1、三羊開肽生物擁有哪些蛋白表達系統(tǒng)?
三羊開肽生物科技有限公司擁有完整的蛋白表達技術平臺:包括原核蛋白表達與純化、酵母蛋白表達與純化、昆蟲細胞蛋白表達與純化、哺乳動物細胞蛋白表達與純化。
2、如何選擇合適的蛋白表達系統(tǒng)?
根據(jù)客戶蛋白來源(細菌、動物或其它)和純化蛋白用途的不同,選擇不同的蛋白表達系統(tǒng)。如果不知道該如何選擇,可以咨詢客戶進行推薦。
3、蛋白服務和長鏈多肽服務如何界定?
<50aa一般做多肽合成,>50aa多肽合成困難,可以嘗試表達。
4、哪些因素會影響基因合成和表達的成本?
基因合成成本主要取決于基因的長度和復雜性。表達(蛋白質(zhì)生產(chǎn))成本主要受表達系統(tǒng)、目的蛋白質(zhì)量和純度,以及其他特殊要求如標簽去除,內(nèi)毒素水平控制,特殊標簽等影響。
5、蛋白表達過程中,雜質(zhì)有些什么?
雜質(zhì)大多是細胞內(nèi)或培養(yǎng)基內(nèi)的物質(zhì),可以通過層析技術去除。
6、蛋白純度最高可以做到多少?蛋白純化后對應純度蛋白應用有哪些?
純度可以達到95%,Biacore和結晶對純度要求較高,一般要求高于90%純度,很難根據(jù)純度界定應用。
7、能保證客戶需要的蛋白有活性嗎?
影響蛋白活性的因素有很多,所以無法保證蛋白的活性,但是三羊開肽會通過蛋白分析給出您在表達和純化中的建議,盡量獲得活性蛋白。
8、通常蛋白在什么條件下保存比較好?
將蛋白等量分裝,在-80℃或液氮中長期貯存,并且要避免多次凍融。
1、抗原多肽設計應滿足什么條件?
為了使生產(chǎn)抗體獲得最佳效果,設計應滿足一個基本條件:在免疫過程中,該抗原既不會產(chǎn)生過強的免疫反應,同時又能產(chǎn)生出對感興趣的蛋白有結合能力的抗體。
2、抗原多肽的序列長度是多少才合適?
通常我們會建議序列長度在8-20個氨基酸殘基之間比較適宜,如果太短,就有多肽太特殊、所產(chǎn)生的抗體與天然蛋白之間的親和力(結合能力)不夠強的風險,同樣,如果序列長度超過20,將有可能引入二級結構,所產(chǎn)生的抗體失去特異性的可能,而且肽鏈越長,通常合成難度增大,不易獲得高純度的產(chǎn)品。
3、制備抗體,通常是選擇蛋白的N端還是C端?
為了避免識別區(qū)域隱藏在蛋白內(nèi)部的風險,我們通常建議選擇蛋白的N,C兩端來產(chǎn)生的相應的抗體。因為在完整的蛋白中,N,C兩端通常是暴露在蛋白表面的。然而,一定要注意膜蛋白的C端疏水性太強,不適合作為抗原。
4、可以使用肽抗原作為陽性對照在蛋白質(zhì)印跡中測試抗血清嗎?
肽抗原(未結合)的分子量 (MW) 太小,無法用于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡 (WB) 測試。為了驗證 WB 中目標條帶的特異性,建議運行“抗體阻斷”對照,使用肽抗原阻斷一抗。推薦的出血稀釋度為 1:1000(等于 1μg/ml),封閉肽約為 2μg/ml。
5、如果只用一個磷酸殘基制造針對肽的抗體,當它在兩個位點都被磷酸化時,它是否仍能識別該蛋白質(zhì)?
如果蛋白質(zhì)在兩個位點都被磷酸化時,單一的磷酸肽抗體可以識別蛋白質(zhì)。但是,如果蛋白質(zhì)僅在一個位點被磷酸化時,雙磷酸肽抗體也可以識別蛋白質(zhì)。因此,很難開發(fā)出一種抗體能夠保證蛋白質(zhì)在兩個位點都被磷酸化時才識別該蛋白質(zhì),而在只有一個位點被磷酸化時不結合。
6、如何定義優(yōu)質(zhì)抗體?
優(yōu)質(zhì)抗體是一種具有適當靈敏度和特異性的抗體,能夠回答您的檢測所提出的問題。但需要注意的是,一種抗體不一定適用于所有應用。
7、載體蛋白交聯(lián)的方法是什么?
將載體蛋白加在遠離抗體識別區(qū)域的一端,在序列中沒有Cys的情況下在N或C端加上Cys為交聯(lián)的首選方法。
8、如何確定是要選擇單克隆抗體還是多克隆抗體?
一般來說,單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低。而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高。與單克隆抗體相比,大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對快速且成本低廉,它們是非特異性的,因為它們能夠識別任何一種抗原上的多個表位。
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